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定期校正大分子相互作用仪是保证结果正确的基础

更新更新时间:2024-03-11

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  大分子相互作用仪(如表面等离子共振(SPR)仪器、等温滴定量热仪(ITC)、生物层析分析仪(BLI)等)是研究蛋白质、核酸等大分子间相互作用的重要工具。为确保实验数据的准确性和重复性,定期对仪器进行校正是非常必要的。以下是一般步骤:
  1. 准备工作:在开始校正之前,确保所有使用的试剂均为分析级,且溶剂需脱气以避免产生气泡。另外,根据所使用仪器的说明书,将仪器预热至推荐的操作温度。
  2. 系统校正:对于SPR仪器,通常需要进行光学系统的校正,包括波长校准和角度校准。这通常通过使用纯净的水或特定的校准液来完成。确保传感器芯片的正确安装,并检查流动池是否干净,无指纹或灰尘。
  3. 基线稳定性:运行缓冲溶液,确保基线稳定。任何温度波动或外部扰动都可能影响基线的稳定性,进而影响实验结果。
  4. 样品制备:准备标准样品,这些样品的浓度和性质应覆盖待测试样品的范围。对于ITC,需要精确测量样品的浓度,并保证参比池内仅含有缓冲溶液。
  5. 标准曲线:使用已知亲和力或热力学参数的标准样品来生成标准曲线。这一步骤有助于后续数据分析的准确性。
  6. 重复性检验:多次测量同一样品以评估仪器的重复性。如果发现较大的偏差,则需要检查仪器的设置或样品的均一性。
  7. 灵敏度检验:对于BLI类的仪器,可通过已知质量的蛋白A/G固定到传感器表面来检验其灵敏度。然后,流过不同浓度的抗体,观察响应信号是否符合预期。
  8. 样品间干扰检查:确保不同样品间没有交叉污染。在测量一系列样品前后注入空白缓冲液,检查是否有前一个样品的残留。
  9. 数据处理软件:确认数据处理软件正常工作,校正参数设置正确,能够准确处理实验数据。
  10. 记录与维护:详细记录校正过程中的所有步骤、使用的试剂及其批号、校正结果等。此外,定期对仪器进行清洁和维护,以保持其最佳性能。
  大分子相互作用仪的校正是一个综合性的过程,涉及仪器的物理状态、化学试剂的质量以及数据处理的准确性。正确的校正可以显著提高实验数据的可靠性,为研究提供坚实的基础。

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